肝細(xì)胞癌（HCC）是全球高發(fā)且最致命的惡性腫瘤之一，且一半以上發(fā)生在中國。乙型肝炎病毒（HBV）感染是我國肝癌發(fā)生的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。然而，隨著肥胖率的不斷上升，代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）已成為HCC增長最快的病因【1,2】。先前研究表明，不同病因肝細(xì)胞癌患者對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制（ICB）療法的響應(yīng)存在顯著差異，其中病毒相關(guān)患者的治療效果顯著優(yōu)于非病毒相關(guān)患者【3,4】。然而，導(dǎo)致這一差異的免疫調(diào)控機(jī)制仍不清楚。薛瑞棟團(tuán)隊(duì)前期結(jié)果【5】揭示，腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞（TAN）在肝癌免疫微環(huán)境形成中扮演了重要角色（圖1），但是TAN在代謝性脂肪性肝炎相關(guān)肝細(xì)胞癌（MASH-HCC）中的功能異質(zhì)性及其對(duì)免疫治療的響應(yīng)差異仍缺乏探究。
2024年12月5日，香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院 Guang Sheng Ling教授團(tuán)隊(duì)和北京大學(xué)-云南白藥國際醫(yī)學(xué)研究中心/國際癌癥研究院/北京大學(xué)第一醫(yī)院 薛瑞棟研究員團(tuán)隊(duì)在國際知名免疫學(xué)期刊Journal of Experimental Medicine（IF=12.6）上發(fā)表了題為“Tumor-associated neutrophils attenuate the immunosensitivity of hepatocellular carcinoma” 的研究論文，該研究通過深度結(jié)合RNA-Seq、生信分析、小鼠模型和免疫機(jī)制探究，首次揭示了SiglecF+ TAN在代謝性脂肪性肝炎相關(guān)肝細(xì)胞癌（MASH-HCC）中具有顯著的免疫調(diào)節(jié)和促腫瘤功能，并進(jìn)一步揭示去除這群中性粒細(xì)胞后能有效提升MASH-HCC對(duì)免疫治療的敏感性。該研究強(qiáng)調(diào)了理解TAN在癌癥中的異質(zhì)性對(duì)改善治療發(fā)展的重要性，為理解MASH-HCC腫瘤微環(huán)境調(diào)控機(jī)制及開發(fā)針對(duì)性治療方案提供了新視角。
文章解析
中性粒細(xì)胞在MASH相關(guān)的HCC中具有致病性
研究團(tuán)隊(duì)通過對(duì)HCC患者的公共數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)分析，并結(jié)合多種小鼠模型實(shí)驗(yàn)，揭示了TAN對(duì)不同類型HCC的影響具有病因依賴性。研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了包括MASH相關(guān)的NRAS/AKT模型以及飲食誘導(dǎo)模型，并以MYC/sgp53模型模擬了乙肝相關(guān)HCC作為對(duì)照。在給予抗Ly6G單抗（用于清除TAN）后，MASH-HCC腫瘤的消減程度顯著較高，表明與病毒相關(guān)的肝癌相比，TAN在MASH-HCC中具有更強(qiáng)的促腫瘤作用。
TANs是異質(zhì)性的，在MASH相關(guān)的HCC中SiglecFhi亞群顯著富集
通過對(duì)小鼠腫瘤、脾臟、淋巴結(jié)等不同部位進(jìn)行scRNA-seq數(shù)據(jù)分析并結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，研究人員發(fā)現(xiàn)MASH-HCC的腫瘤微環(huán)境高度富集SiglecF高表達(dá)（SiglecFhi）的TAN亞群。接下來對(duì)SiglecFhi TAN的功能進(jìn)行探索。通過體內(nèi)特異性清除中性粒細(xì)胞以及體外分選共培養(yǎng)等功能實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這群SiglecFhi TANs可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞干性、增殖和遷移能力，推動(dòng)了腫瘤的惡性發(fā)展。對(duì)是否與SiglecFhi TANs共培養(yǎng)的RIL175肝癌細(xì)胞系進(jìn)行bulk分析，結(jié)合體內(nèi)清除實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)一步構(gòu)建Mrp8Cre TGFβfl/fl小鼠模型明確SiglecFhi TANs通過產(chǎn)生TGFβ與腫瘤細(xì)胞交互作用。同時(shí)，研究人員對(duì)未經(jīng)治療的HCC患者手術(shù)切除的腫瘤進(jìn)行了多重免疫熒光（mIHC)，結(jié)果證實(shí)，與HBV感染相關(guān)的HCC腫瘤相比，MASH-HCC腫瘤中產(chǎn)生TGFβ的TAN比例顯著更高。這些數(shù)據(jù)共同揭示了SiglecFhi TAN在MASH-HCC患者腫瘤發(fā)生中的重要作用。
SiglecFhi TANs直接作用于腫瘤細(xì)胞從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生
為了探索誘導(dǎo)SiglecFhi TAN亞群產(chǎn)生的因素，研究團(tuán)隊(duì)基于轉(zhuǎn)錄因子分析發(fā)現(xiàn)SiglecFhi TAN顯著富集c-Myc轉(zhuǎn)錄因子，同時(shí)下調(diào)了與中性粒細(xì)胞分化（Cebpa）、成熟（Fos、Spi1）和活性（Jund）相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子。脂質(zhì)組學(xué)分析進(jìn)一步揭示亞油酸和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）是SiglecFhi TAN生成的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。這些因子在MASH-HCC患者體內(nèi)顯著升高，通過激活c-Myc轉(zhuǎn)錄因子，促使中性粒細(xì)胞分化成為具有分泌TGFβ的SiglecFhi TAN。
SiglecFhi TANs通過TGFβ直接抑制HCC的抗原性
基于臨床治療隊(duì)列數(shù)據(jù)，研究團(tuán)隊(duì)揭示SiglecFhi TAN與免疫檢查點(diǎn)治療不響應(yīng)顯著相關(guān)。通過多種小鼠模型與體外實(shí)驗(yàn)，研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)SiglecFhi TAN可以直接抑制腫瘤細(xì)胞的MHCI抗原呈遞功能，降低腫瘤免疫原性，導(dǎo)致免疫檢查點(diǎn)治療耐藥。通過構(gòu)建OVA-NRAS/AKT HCC小鼠模型，證實(shí)阻斷TGFβ信號(hào)通路能夠消除SiglecFhi TAN對(duì)腫瘤MHCI表達(dá)和抗原呈遞的抑制作用，表明SiglecFhi TAN可以通過TGFβ限制腫瘤細(xì)胞的抗原性，從而促進(jìn)免疫逃逸。
SiglecFhi TANs移除使對(duì)免疫治療抵抗的HCC對(duì)抗PD-1單抗治療敏感化
最后，研究發(fā)現(xiàn)移除SiglecFhi TAN能夠通過增強(qiáng)CD8+ TILs的功能，改善腫瘤細(xì)胞識(shí)別能力，并顯著提高抗PD-1治療的效果。在小鼠HCC模型中聯(lián)合抗Ly6G和抗PD-1治療可以顯著增強(qiáng)腫瘤控制效果，這些結(jié)果首次揭示了SiglecFhi TAN促進(jìn)腫瘤侵襲性表型、高增殖能力和增強(qiáng)免疫逃逸能力的獨(dú)特功能。
# 研究中涉及的mIHC實(shí)驗(yàn)（Panel：CD66b、TGFβ、DAPI）利用艾克發(fā)生物的AlphaXTSA®多靶點(diǎn)免疫組化染色試劑盒直觀檢測(cè)各標(biāo)志物的表達(dá)情況，結(jié)果顯示與HBV感染的HCC腫瘤相比，MASH相關(guān)的HCC腫瘤中產(chǎn)生TGFβ的TANs（CD66b+TGFβ+）的百分比顯著更高。#
綜上所述，本研究首次揭示了SiglecFhi TAN在MASH-HCC中的關(guān)鍵作用及其對(duì)免疫治療耐藥性的影響，這項(xiàng)新的見解擴(kuò)展了我們對(duì)TANs在腫瘤發(fā)生中扮演的多方面角色的認(rèn)識(shí)；SiglecFhi TAN可能是對(duì)抗HCC的潛在關(guān)鍵免疫治療靶點(diǎn)，這為腫瘤微環(huán)境研究和免疫治療開發(fā)提供了新方向，對(duì)癌癥免疫治療的進(jìn)步具有重要意義。
艾克發(fā)生物專注腫瘤微環(huán)境研究十余年，通過mIHC平臺(tái)發(fā)表多篇文獻(xiàn)，截至2024年9月30日，引用AlphaXBio產(chǎn)品及服務(wù)的文獻(xiàn)條目平均影響因子高達(dá)16.15分（點(diǎn)擊進(jìn)入鏈接）！
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參考文獻(xiàn)：
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